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ELISA加樣關(guān)鍵細節(jié):避免誤差的加樣順序與操作技巧

更新時間:2025-08-04  |  點擊率:152

  ELISA加樣關(guān)鍵細節(jié):避免誤差的加樣順序與操作技巧

  一、加樣順序優(yōu)化?

  標準品與樣本的排列?

  標準品梯度稀釋?:從高濃度到低濃度依次加樣,避免槍頭殘留污染?。

  樣本加樣順序?:建議按樣本編號順序加樣,減少操作偏差?。

  副孔設(shè)置?:標準品和樣本均需做雙孔(副孔),提高數(shù)據(jù)可靠性?。

  空白孔與對照孔?

  空白孔(僅加稀釋液)用于調(diào)零,對照孔(如陽性對照)監(jiān)控實驗有效性?。

  二、操作技巧與注意事項?

  槍頭與移液校準?

  使用低吸附槍頭,定期校準移液器。

  換槍頭操作:每次加樣后更換槍頭,避免交叉污染?。

  加樣手法?

  垂直懸空加樣?:槍頭勿接觸孔壁,減少液體殘留?。

  避免氣泡?:加樣后輕彈板底,消除氣泡干擾光路?。

  孵育與洗滌?

  覆膜需貼緊,減少蒸發(fā)導致的邊緣效應?。

  手工洗滌時,拍板力度適中,避免抗原抗體復合物脫落?。

  三、常見誤差規(guī)避?

  溫度一致性?:試劑與樣本需平衡至室溫(20-25℃),避免動力學反應差異?。

  顯色終止時機?:最高標準品顏色不再加深(或620nm吸光值穩(wěn)定)時終止反應?。

  通過規(guī)范加樣順序與操作細節(jié),可顯著提升ELISA實驗的重復性與準確性?。

  注:以上資料僅供參考,不同品牌產(chǎn)品可能存在設(shè)計差異,操作前建議參考說明書?。

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